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高效液相色譜柱的選擇
現(xiàn)代高效液相色譜中，分離效果好壞的一個重要指標(biāo)是色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，因此，要做合適的選擇，必須對此有一定的認(rèn)識和了解。當(dāng)然，像藥典專用高效液相柱、中藥材專用分析柱、益母草專用柱、利巴韋林專用柱、甘露醇專用柱、益母草專用柱、氨基酸專用柱、檳榔專用柱、乳糖專用柱、人參專用柱、麻黃專用柱、木犀草苷分析柱、葡甲胺專用柱、人血白蛋白專用柱、肝素鈉專用柱、國達(dá)色譜柱、硫酸軟骨素專用柱、頭孢他啶專用柱、苯海拉明專用柱、藥典專用柱、苦參堿專用柱、抗體專用柱、頭孢聚合物專用體積排阻柱、石英毛細(xì)管柱等一些專用柱可以另作思考。
1、 硅膠基質(zhì)填料
正相色譜爭相色譜用的固定相通常為硅膠以及其他具有極性官能團(tuán)的鍵合相填料，如NH2 APS CN和CPS.由于硅膠表面的硅羥基或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng)。因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的祖墳最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如正己烷，氯仿，二氯甲烷等。
反相色譜
反相色譜用填料經(jīng)常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對較弱官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會再色譜上有更強(qiáng)的保留。通常的反相填料有C18，C8，C4等。
2、聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯，二乙烯基苯共聚物或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優(yōu)點(diǎn)是在pH值在1-14條件下均可使用，相對于硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性；大孔的聚合物對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。現(xiàn)有聚合物填料的缺點(diǎn)是相比硅膠基質(zhì)填料色譜柱效較低。
3、 怎樣選擇填料粒度
目前，商品化的色譜填料粒度從1um到超過30um均有銷售，而分析分離主要用3-5um填料，填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數(shù)，即柱效和背壓，粒度越小，柱壓越大，柱壓的增加限制了粒度小于3um的填料應(yīng)用。在相同選擇性條件下，提高柱效可提高分離度，但不是唯一的因素，如果固定相選擇正確，只是分離度不夠，那么選用更小的粒度的填料是很有用的，3un填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%，然而，3um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍，與此同時，柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱，即相同的塔板數(shù)或分離能力，但是柱長縮短，分析時間縮短。另外，可以采用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度，比如用乙腈代替甲醇以降低色譜柱的壓力。
4、其他無機(jī)填料
其他HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化，由于其特殊的性質(zhì)，一般僅限于特殊的用途。如，石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳黑的表面即是保留的寄出，不再需其他的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)。石墨化碳黑可以用于分離某些幾何異構(gòu)體，由于HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何pH與溫度下使用。氧化鋁也可以用于HPLC。氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定限制，所以未能廣泛應(yīng)用。新型色譜氧化鋯質(zhì)填料也可以用于HPLC，商品化的只有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用pH1-14,溫度可達(dá)100℃，由于氧化鋯填料是最近幾年才開始研究，加之而臨的實(shí)驗(yàn)難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在開發(fā)中。
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